1.    微生物检验标本采集

微生物学检验标本的正确采集、运送及处理，与细菌的培养、鉴定结果有十分密切的关系；对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、炭疽、肺鼠疫等)患者采集标本时,必须按国家规

范化要求严格注意生物安全；医生、护士、检验人员均应重视微生物学检验标本正确采集的有关问题，并有责任向患者及其家属进行正确采集标本的宣传和指导。

1.1    微生物学检验标本采集、运送、验收和处理注意事项

1)标本采集

①申请单标记必须清楚(姓名、性别、年龄、病例号、临床诊断、标本来源、采集时间、检查项目、抗生素应用情况等)，以便实验室能够合理选择培养环境和培养基；

②尽量在抗生素应用前采集标本，以提高阳性检出率和避免漏检；

③标本采集应严格执行无菌操作；

④咽拭、肛拭、伤口拭子等拭子标本，应插入运送培养基送检；

⑤痰、尿液、伤口拭子等混有正常菌群的标本，不可放入肉汤培养基内送检； ⑥采集标本的容器必须经灭菌处理，但不可用消毒剂。

2)标本运送

①标本采集后应尽快送到微生物实验室；

②标本采集后在室温下超过2h未送达实验室，可视为不合格标本。

3）标本验收

①实验室只能接受和处理合格标本；

②实验室对不合格标本退回必须说明原因，并应及时与临床联系。

4）注意事项

①微生物检验样本必须按要求采集转运，否则将影响检查结果．并给评价其意义带来麻烦甚至误导。

②微生物样本极易被污染，污染的样本杂菌大量繁殖抑制病原菌生长，条件致病菌也是致病菌，如污染条件致病菌将误导临床，造成对患者的损害以及经济和时间的浪费。

③某些标本离体极易死亡，应在床边采取和接种或立即保温送至实验室检验。室温放置或延迟送检，可使检出的阳性率降低；不能使用冷藏的样本检验。

④厌氧菌样本采取必须隔绝空气，混入空气的样本影响检验结果，不能使用。

1.2    微生物学检验标本采集和处理

1）尿液标本采集和处理

通常留取晨起**次尿液(此时尿液在膀胱内储存 4h 以上)；尿液采集后要及时送检，并保证 2h 内接种；不能及时送检和接种时，尿液应置 4～8℃冰箱保存；冷藏标本应于 8h 内接种；怀疑沙门氏菌感染时，应于发病2w左右采集尿液，怀疑钩端螺旋体感染时，应于发病后 2w采集尿液，上述时间此时阳性率高。尿液微生物学检验标本采集方法如下：

①中段尿采集法：成年男性和女性分别用肥皂水或 1：1 000高锰酸钾水溶液清洗尿道口和外阴部，再用灭菌水冲洗尿道口，无菌生理盐水冲去消毒液，然后排尿弃去前段尿液，收集中段尿 5～1 0ml盛于带盖的无菌容器内送检。

②导尿法：用导尿管导取 10～15ml 尿液，置灭菌容器中送检；长期留置导尿管者应更换新导尿管留尿；留置导尿时，用无菌消毒法消毒导尿管外部及导尿管口，用无菌注射器通过导尿管抽取尿液送检(不可采集尿液收集袋中的尿液送检)；

③集尿法：怀疑结核分枝杆菌感染时，于清洁容器中留取 24h尿液，取其沉渣1 0～1 5ml送检。

④耻骨上膀胱穿刺法：培养结果与临床病情矛盾时可采用此法，一般较少应用；

⑤肾盂尿采集法：必须由临床医生采集。

注意事项：正常人的尿液是无菌的，除外尿道有正常菌群外，还有条件致病菌，而这些细菌又是尿路感染中常见的致病菌，故应该注意无菌采集。

2）粪便标本采集和处理

①采集时间：

a腹泻患者于急性期，尽量在用药前采集粪便；

b伤寒患者于发病2w以后采集粪便；

c怀疑霍乱时立即采集粪便送检。

②采集方法：

a自然排便法：取新鲜粪便的黏液、脓血、或絮状物等有意义成分，2～3g或 1～2 m1，盛无菌容器内或置于保存液或增茵液内送检；若疑似霍乱者应置于碱性蛋白胨水中(PH8.6)。

b 直肠拭子法：难以获得粪便或排便困难患者及幼儿可采用此法，将拭子前端用无菌甘油或生理盐水湿润,然后插入肛门约 4～125px(幼儿 2～75px)，轻轻在直肠内旋转。擦取直肠表面粘液后取出，盛于无菌试管中或保存液中送检。

3)痰及下呼吸道标本采集和处理

①自然咳痰法：

a晨痰为佳；

b先冷开水洗漱、清洁、口腔和牙齿；

c再用力咳出呼吸道深部的痰，吐至无菌容器中；

d痰量不得少于1ml；

e痰咳出困难时可先雾化吸入 NaCI溶液(100g／L，加温到45℃)使痰容易咳出。查结核分枝杆菌，应留取24小时痰。

②小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭子深入咽部，小儿因压舌板刺激引起咳嗽，喷出的肺或气管分泌物粘在拭子上即可送检。

③支气管镜、支气管穿刺、支气管肺胞灌洗等采集法，此采集方法必须由医生操作。

a 气管导管法：气管插管吸取下呼吸道痰液。

b气管镜采集法：用气管镜在肺内病灶附近用导管吸取或活用支气管刷直接取得。

④呼吸道标本采集方法：鼻咽拭子法，先用清水漱口，对光坐，头向上仰，口张大，用压舌板轻压舌根，用棉拭子在病人咽后壁，悬雍垂后侧涂抹数次．立即放入无菌试管中。

注意事项：痰经过口腔，所以患者应用清水漱口数次，尽量排除口腔内大量杂菌。

4)血液及骨髓培养标本

①血培养标本采集指征：

对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前，应及时进行血液培养，患者出现以下体征可作为血培养的重要指征：

a发热(≥38℃)或低热(≤36℃)

b寒热

c白细胞增多(>10×109／L，特别是在有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多时)

d粒细胞减少(成熟的多核白细胞<1×109／L)

e血小板减少；

f皮肤粘膜出血；

g昏迷；

h多器官衰竭；

②*常用的方法为血液增菌培养法。培养瓶分为需氧瓶和厌氧瓶两种。每瓶需要 8～10ml。儿童瓶为需氧瓶每瓶需血液1～3ml，另外，脑脊液和胸腹水也可用血液增菌培养瓶，但仅需要儿童瓶，标本量与血液相同。

a抗生素治疗前，严格无菌静脉采血 8～10ml(儿童 l～4m1)；

b无菌注入专用培养瓶(成人、儿童、需氧菌、厌氧茵、L型茵需要不同培养瓶)中送检；

c如已用抗生素不能停用时，可于48h内分别于下次用抗生素之前，采取 6份血液标本送检；

d必要时可需氧菌、厌氧茵(占10％)和 L型菌同时培养；

e疑为心内膜炎时，为提高阳性检出率，可酌情不同部位、不同时间，多次采血或动脉采血进行培养；

f必要时可取骨髓l～2 ml，无菌注入专用培养瓶中送检。

注意事项：血液在正常情况下为无菌标本，应严格按照无菌操作，避免杂菌污染。一般病人在发病初期 1~2天或发热高峰时采集血液标本，用一次性注射在肘静脉采血，采血前局部皮肤应彻底消毒。对亚急性细菌性心内膜炎等病人，应从肘动脉或股动脉采血为宜。

5)脑脊液

①采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，**是在应用抗生素之前采集脑脊液。

②采集方法：无菌腰穿采集脑脊液3～5 m1 分装到 3 个无菌小瓶中(各 1～2m1)。用于细菌和病毒检测时脑脊液量不少于1 m1；用于真菌和抗酸杆菌检测脑脊液量不少于 2m1。

6）穿刺液培养标本

①穿刺液培养标本包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。

②采集时间：一般在用抗生素等抗菌药物治疗之前，或在停止使用抗菌药物之后 2～3d采集标本。

③采集方法

a无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本；

b标本采集量应>1ml(结核分支杆菌培养时应为 l～5m1)；

c标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中立即送检；

d可在盛器中先加入灭菌肝素然后再加入穿刺液，以防止穿刺液凝固(0.5ml肝素可抗凝 5ml标本)。

7)胃液及胆汁培养

标本抽取空腹胃液5 ml，置无菌管内送检；胆汁培养标本由十二指肠引流法或胆囊穿刺法或手术中留取胆汁，采集胆汁量为5 ml，置无菌管内送检；胃液和胆汁采集后必须立即送检。

8)脓汁和病灶分泌物培养

标本采集前局部消毒后无菌采取脓汁或病灶分泌物或组织。标本采集后立即置无菌管内送检。

9)眼、耳、鼻、咽拭子培养标本

①采集眼分泌物：先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭于拭干，再用无菌棉拭于采集分泌物。

②采集咽分泌物：先用清水撤口．用压舌板将舌向下向外压，将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，切勿接触口腔和舌粘膜。

③采集耳、鼻或鼻咽分泌物：直接用拭子涂抹病灶部位,切勿接触周围粘膜或皮肤。 标本采集过程中应注意避免粘膜上的正常菌群污染,标本采集后连同拭子一起置无菌管内送检。

10）泌尿生殖道培养标本

①尿道分泌物：清洗尿道、采取尿道、溢出的脓性等分泌物,或用无菌拭子插入尿道 2-100px处轻轻转动后取出,置无菌试管中送检。

②阴道、宫颈分泌物、通过阴道扩张器,用灭菌拭子采取阴道口或宫颈管 1-50px处分泌物,置无菌试管中送检。避免阴道分泌物污染拭子。

③宫腔分泌物：在必要时用外套保护膜的灭菌导管抽取。

④前列腺液：清洗尿道、冲洗膀胱后用前列腺按摩法采取前列腺液于无菌容器内送检。

⑤精液:受检者应5天未排精,清洗尿道后手淫或体外排精法,射精于无菌容器内送检。

⑥溃疡分泌物：灭菌生理盐水溶液清洗患处,用无菌拭子取其边缘或基底部的分泌物,置无菌试管中送检。

11）烧伤感染培养标本

烧伤 12h 后无菌棉拭子操做采集标本；要注意从多个创面取样,烧伤严重感染时易发生败血症,创棉取样同时应采集血样送做血培养(必须同时做需氧菌培养和厌氧菌培养) 。

12）厌氧菌感染培养标本

①标本采集

a标本不能被正常菌群污染,采集时尽量避免接触空气,立即送检,严格遵守无菌操作

b血液及其他体液(胸水、腹水、心包液、关节液、胆汁、脑脊液等)注入厌氧血培养,立即送检

c深部脓肿,在病灶部位开放前取材,可用针管抽取,针头用无菌胶塞密封,也可用血气采集针抽取,立即送检

d抽出液体标本后,要尽快排除注射器内的空气。

②标本运送

a标本采集后不得冰箱储存,必须尽快(半小时内)送实验室

b运送方法:a注射器运送(标本抽取后尽快排除空气)或接种道专门的运送培养基中直接运送b含运送培养基的无氧小瓶运送c 厌氧罐运送(组织块);d 大量液体标本运送时要装满标本瓶兵立即驱氧,加盖运送e 一般不采用棉拭子法

③建议使用微生物检验组合:

a细菌学涂片:快速回报标本中可能的病原微生物

b普通细菌培养：(3天);

c厌氧培养：(7天) ;

d真菌培养：(5 天);

e微生物分子生物学检测：(2天)

13）真菌感染培养标本

①浅部真菌感染标本采集

a皮肤：常规消毒皮肤，从皮肤癣菌皮损边缘刮取鳞屑，置无菌平皿内送检，皮肤溃疡则采集病损边缘脓汁或组织；

b指(趾)指甲消毒指(趾)指甲并去掉其表面部分，取可疑病变部分，用刀片修成小薄片 5～6 片置无菌容器内送检；

c毛发：采集根部断折处，至少5～6 根送检。

②深部真菌感染标本采集

a血液：无菌采血8～10 m1，注入未用过抗生素的或可中和抗生素的血培养瓶中，立刻送检，如不能立刻送检时血培养瓶应放室温，但不可超过 8~9h；

b脑脊液采样量不少于3～5 m1,分别注入两支无菌试管中送检(一管做真菌培养和墨汁染色一管测隐球菌抗原和其他培养) ；

c呼吸道及泌尿生殖道深部真菌感染标本采集同一般菌培养标本。

14）皮肤（主要指伤口、创面脓液等）标本采集方法

①对采集标本部位应首先清除污垢，再以碘酒或酒精消毒，防止皮肤表面污染菌混入影响检验结果，盛放标本器皿应无菌。

②封闭性脓肿：病灶局部消毒后，以无菌干燥注射器穿刺抽取．将采集的脓液注入灭菌试管．对疑似厌氧菌的脓液，抽取脓液后立即排出注射器内的空气，同时将针头插入灭菌橡皮塞，防止空气进入。

③开放性脓肿及脓性分泌物：先做局部消毒再用无菌棉拭子采取脓液及病灶深部分泌物，并置无菌容器内送检。

④大面积烧伤的创面分泌物因创面的部位不同，细菌种类不同，故应用无菌棉拭子多部位采集脓液及分泌物．置于无菌试管。注意事项：烧伤 12小时内的创面及分泌物中细菌检出率较低。

15）空气培养标本采集方法

①采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。

②采样高度：与地面垂直高度80~1 1250px

③布点方法：室内面积≤30 m2，设一条对角线上取三点，即中心一点，两端各距墙 1m处取一点；室内面积>30 m2，设东、南、西、北、中5点，其中东、南、西、北距墙 lm。

④采样方法：用225px直径普通培养琼脂平板在采样点暴露 5分钟后送检培养。

⑤标本保存：

a采样后必须尽快送检。

b在平皿上注明各采自哪个室．用胶布把平皿和平皿盖子固定好以免在送检途中平皿和平皿盖子分离而造成污染。